新藥研發服務
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炎癥性腸病（IBD）模型
炎癥性腸炎（Inflammatory Bowel Disease, IBD）是一組慢性、復發性腸道炎癥性疾病，要緊包括潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis, UC）和克羅恩病（Crohn's Disease, CD）。為滿足臨床前對該疾病的病因、犯病機制及新開發藥物藥效等研究，目前已有多種動物模型被廣泛應用，如化學誘導模型，自發性模型，基因改造模型和過繼性T細胞轉移模型等。其中葡聚糖硫酸鈉（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS）誘導的動物模型是使用最廣泛的化學誘導IBD模型。DSS可損害結腸上皮細胞的緊密連接和基底膜，從而增加腸道浸透性，導致腸道菌群和其他抗原進入黏膜下層和體循環，激活免疫炎癥反應，誘導結腸炎癥狀。動物表現出腹痛、腹瀉、便血、體重減輕、勞累等臨床癥狀。優點是操作簡單，成功率高，重復性好，其癥狀和組織學轉變均與人類臨床潰瘍性結腸炎類似，且可以通過給予動物自由飲用不同濃度的DSS水溶液，制成急性和慢性兩種結腸炎模型，是研究UC犯病機制和藥物療效較為理想的模型。
創模生物在C57BL/6J小鼠上建立了穩定的DSS誘導的IBD疾病模型，可用于潰瘍性結腸炎的臨床前研究和藥效評價。
- Case：DSS誘導的IBD小鼠疾病模型用于評價環孢菌素A（Ciclosporin A, CsA）的藥效
一、預防性給藥
造模和藥效評價過程：
評價指標：
1、體重
天天一次記錄體重變化
2、疾病活動指數（DAI）評分
DAI＝（體重下降分數＋大便性狀分數＋便血分數）/3。1）體重下降分數：體重下降百分率（體重不變爲0，1-5爲1分，5-10爲2分，10-20爲3分，大于20爲4分）；2）大便性狀分數：大便黏稠度（正常爲0，軟便爲1分，黏液樣便爲2分，稀液狀便爲3分）；3）便血分數：大便血崩（正常0分，隱血指示劑淺藍爲1分，隱血指示劑藍色爲2分，隱血指示劑深藍爲3分，肉眼血便爲4分）。
DAI可以對小鼠發病情況進行量化分析。天天1次對小鼠進行DAI打分。
3、結腸長度
實驗結束時，測量結腸長度。
4、直觀腸粘膜損傷（CMDI）評分
實驗結束，對小鼠進行CMDI評分。 CMDI評分標準：無損害為0分；輕度充血，水腫，外表滑溜，無糜爛或潰瘍為1分；充血水腫，黏膜毛糙呈顆粒狀，有糜爛或腸粘連為2分；高度充血水腫，黏膜外表有壞死及潰瘍形成，潰瘍最大縱徑小于1.0cm，腸壁增厚或外表有壞死及炎癥為3分；在3分基礎上潰瘍最大縱徑大于1．0 cm或全腸壁壞死為4分。
5、病理檢測
實驗結束後，摘取結腸組織，進行HE染色，病理檢查。
G1 Vehicle 腸粘膜固有層散在少量淋巴細胞，并見少量游離狀中性粒細胞。
G5-DSS 腸粘膜局灶潰瘍形成，可見炎性滲出物及肉芽組織增生，并見較多炎細胞（其中見較多嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、中性粒細胞、組織細胞等）及淋巴小結。
G3 DSS+CsA 腸粘膜固有層散在少量淋巴細胞，并見少量游離胰腺組織。
總結：實驗數據顯示，造模組（G2 DSS）相關于未造模組（G1 Vehicle），動物體重有所下降，且DAI和CMDI評鮮明顯升高，Day7檢測到結腸長度明顯縮短；潰瘍形成可見炎性滲出物及肉芽組織增生，有較多炎細胞浸潤及淋巴小結。給藥組（G3 DSS+CsA）的動物體重變化不明顯；DAI和CMDI評分略有升高；Day7檢測到結腸長度縮短，但縮短程度小于造模組（G2 DSS）；病理結果顯示結腸癥狀顯著緩解，與未造模組（G1-Vehicle）病理結構類似。這表明DSS誘導C57BL/6小鼠炎癥性腸炎疾病模型造模成功，CsA預防性治療方案對DSS誘導C57BL/6小鼠炎癥性腸炎疾病模型的臨床癥狀顯著緩解。
二、治療性給藥
造模和藥效評價過程：
評價指標：
1、體重
天天一次記錄體重變化
2、疾病活動指數（DAI）評分
實驗結束時，對小鼠進行DAI打分。
3、結腸長度
實驗結束時，測量結腸長度。
4、直觀腸粘膜損傷（CMDI）評分
實驗結束，對小鼠進行CMDI評分。
5、病理檢測
實驗結束後，摘取結腸組織，進行HE染色，病理檢查。
G1 Vehicle 腸粘膜固有層散在少量淋巴細胞，并見少量游離狀中性粒細胞。
G4 DSS 腸粘膜局部明顯變薄，此區固有層未見大腸腺，可見稍多炎細胞（淋巴細胞、嗜酸性粒細胞等），另見灶性粘膜缺失，此區未見明顯炎反應及肉芽組織（考慮為人工假象），另見淋巴小結。
G2 DSS→CsA 腸粘膜局部潰瘍形成，可見炎性滲出物及肉芽組織增生，并見大批炎細胞（其中見大批中性粒細胞、淋巴細胞、組織細胞等）及淋巴小結，部分腺上皮示增生性轉變，部分腺上皮示低級別上皮內瘤變。
總結：實驗數據顯示，造模組（G4 DSS）相關于未造模組（G1 Vehicle），動物在造模過程中持續下降，Day7制止DSS刺激后，體重有所恢復；Day13 DAI評分也明顯低于Day7；Day13與預防性給藥實驗中的造模組（G5 DSS）的Day7相比，結腸長度有所增長，CMDI評分略降低（不排除個體差異）；病理結果顯示有大批炎細胞浸潤，腸粘膜變薄，潰瘍形成。給藥組（G2 DSS→CsA）的動物體重在造模過程中持續下降，Day7制止DSS刺激并連續給藥后，體重有所恢復，恢復程度大于造模組（G4 DSS）；Day13 DAI評分也明顯低于Day7，Day13比預防性給藥實驗中給藥組（G3 DSS+CsA）的Day7 結腸長度有所增長，CMDI評分略高；病理結果顯示與造類似，但也顯示出部分腺上皮增生修復性轉變。這表明CsA治療性給藥方案對DSS誘導C57BL/6小鼠炎癥性腸炎疾病模型的體重減輕有所緩解，其他臨床癥狀如糞便粘稠度、便血情況、結腸長度和腸粘膜損害程度，給藥組對比造模組沒有表現出明顯的緩解，兩組在Day7~13癥狀有所緩解要緊依靠于制止DSS刺激。
綜上所述，CsA在DSS誘導的IBD小鼠疾病模型有一定的藥效，但預防性給藥結果更好。
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